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超聲波粉碎儀在鏈霉菌超聲破碎時(shí)的方法條件

更新時(shí)間:2016-12-23  |  點(diǎn)擊率:3451
  超聲波粉碎儀可儲存5個(gè)控制模式。且有定時(shí)數(shù)字顯示,輸出能量由光條顯示,0~100%連續(xù)可調(diào),操作直觀方便。超聲波粉碎儀工作方式有間斷和連續(xù)兩種選擇,間斷工作時(shí),脈沖寬度和間斷時(shí)間可分別設(shè)定。超聲波粉碎儀的工作時(shí)間可由數(shù)字定時(shí)器控制,達(dá)到預(yù)定時(shí)間自動轉(zhuǎn)變?yōu)榇龣C(jī)狀態(tài),定時(shí)范圍1min~99min。超聲波粉碎儀可人為自由控制工作和截止時(shí)間,使用靈活方便,適用于少量樣品的處理工作。
  那么超聲波粉碎儀在鏈霉菌超聲破碎的,使用的方法條件是什么呢?
  前處理一般就是配置成一定濃度的菌懸液。使用超聲波粉碎儀進(jìn)行超聲破碎時(shí)采用的具體條件是:
  1、取細(xì)菌的24 h培養(yǎng)液于5 000 r/min下離心5 min收集菌體;
  2、用pH 7.5的Na2HPO-NaH2PO緩沖液洗滌3次,再用該緩沖液將菌體配成1:3的菌懸液.置于40 mL大塑料試管內(nèi);
  3、將大塑料試管置于冰浴中,采用超聲波破碎(功率200 W,1/2”探頭,破碎30 s,間歇30 S);
  4、破碎液于12 000 r/min下高速冷凍離心30 min,收集細(xì)胞碎片和上清液,超聲破菌流程與上述基本一致,就是洗滌菌體也可以用預(yù)冷的生理鹽水或pH8的Tris-HCl,洗滌一次就可以。另外超聲劑量隨樣品量、菌體改變比較大,功率可以到400-600w,超5s,停5s,冰浴,要加終濃度1 mM的PMSF。為確定合適的超聲強(qiáng)度和次數(shù),有必要隨時(shí)鏡檢觀察菌體是否*破碎。放線菌屬于原核生物系統(tǒng)進(jìn)化樹上的(G+C)摩爾百分含量(mol%)高的革蘭氏陽性菌分枝類群。在做大腸桿菌超聲時(shí),采用的是400W超聲波粉碎儀,超5停5的方法,效果不錯,但是用在鏈霉菌上,似乎沒什么效果,因?yàn)榇竽c桿菌式屬于革蘭氏陰性菌的。
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